xxx集团位于风光秀丽的黄海之滨,地处中国山东对外开放的黄金地带,与日本群岛,朝鲜半岛隔海相望,集团下辖3多处企业,总资产14亿元
四,样品处理过程
1. 采样者填写采样记录单,2. 主要项目:采样时间,地点,单位,样品名3. ,采样品的份数及采样者名4. 字.
5. 检验者根据采样记录单填写检验记录单主要项目:采样时间,检验时间,被检单位,样品名6. 称和菌落计数等.
7. 将数份样品按照检验记录单的顺序排好,8. 剪样,9. 用225ml灭菌水加入到均质带中,10. 放入均质机中均质1min.
11. 将均质的样品液做.0.1或0.01mol/l的稀释液,12. 在培养皿中加1ml的稀释液.(注:带有面包粉的产品做0.01mol/l浓度的稀释).
13. 倒皿,14. 倒双层.
15. 将2ml的稀释液加入已经备16. 好的检验大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的试管中.
17. 在剪样过程中对各样品约10克放入SC沙门氏菌的增菌液中.
18. 将培养皿放入37摄氏度的培养箱中培养48小时计数.
19. 将样品做沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的增菌液挑出在其选择性培养基上划线鉴定,20. 观察大肠杆菌的产气情况.
21. 填写检验记录单,22. 细菌总数,23. 大肠菌群计数,24. 大肠杆菌,沙门氏菌,金黄色葡萄球菌的检出与否.
附 A 培养基的配置
1. 根据药品配置的用量,2. 将培养基配好,3. 每瓶400ml,4. 结晶紫中性红胆盐琼脂用于大肠菌群的计数,5. 平板计数琼脂用于计细菌总数.要将结晶紫中性红胆盐琼脂煮沸三次用报纸封口放入水浴箱中保温待用.平板计数琼脂要经高压灭菌,6. 121摄氏度度,7. 15min后放入水浴箱中保温待用.
8. EC肉汤按照要求的比例配置,9. 试管中要加杜氏小管,10. 121摄氏度放三次气,11. 保证杜氏小管没有气泡干扰实验结果.EC肉汤用小试管每管加8ml.
12. Nacl肉汤也同13. 样按照要求的量配置,14. 用大试管加10ml要高压灭菌121摄氏度15min.
15. 盐水每管9ml高温灭菌121摄氏度15min.
B 计数后废皿的处理
1. 将废皿放入灭菌锅中121摄氏度15min.
2. 将废皿中培养物液倒出,3. 用洗洁精清洗干净,4. 再用水冲洗干净.
5. 将废皿叠放入铁桶中将放气的孔对好放入高温箱中干燥160摄氏度以上3h
6. 将皿放入无菌间摆放好,7. 小盖向上待用.
C SN0168-92 SN0169-92 SN0170-92 SN0172-92
五,微生物检验项目及详细步骤
食品平板菌落计数:
1. 培养基和试剂
1.1 平板计数琼脂:称取9.4g于400ml蒸馏水,1.2 加热溶解,1.3 121摄氏度15min高压灭菌(每瓶约倒八个样品的板)
1.4 225ml无菌生理盐水:将每个小三角瓶中装入225生理盐水,1.5 盖盖,1.6 于121摄氏度15高压灭菌
1.7 9ml无菌生理盐水:于大试管中装入9ml盐水,1.8 塞上皮塞,1.9 于121摄氏度15min高压灭菌
1.10 8.5g/L盐水:称取8.5g氯化钠溶解于1000ml蒸馏水中,1.11 搅拌至溶解,1.12 分装于三角瓶和大试管中.
2. 样品匀液制备3. :
用75%乙醇在包装口处擦拭后取样,称取25g样品,加入225ml无菌生理盐水,均质1min,制成1:10的样品匀液.
用灭菌吸管准确吸取1:10的样品匀液1ml,放入装入9ml盐水的大试管中,用吸管连续吸取几次混匀.制成1:100稀释液,依次制备成1:1000样品匀液.
4. 平板接种:
3.1 选择合适的稀释度,用灭菌吸管吸取1ml样品液放入作了适宜标志的平板内.每个稀释度的样品一般做两个板.
3.2 倒板:先到入一层平板记数琼脂,立即将平板内的样品液和琼脂培养基充分混合,待琼脂凝固后,再倒入少量琼脂,覆盖均匀
3.3 同时做空白对照.(有时9ml, 225ml生理盐水都要做空白).
5. 培养:
待琼脂凝固后将平板翻转,立即放入37摄氏度左右的恒温箱培养箱培养48h左右.
6. 菌落记数和记录:
培养后立即记数,25——250个菌落为合适范围.如两个板上的菌落在合适范围内,先计算两个板的平均值.再将平均值乘以相应的稀释倍数,作为每克(毫升)样品中平板菌落数).
注:稀释度的选择一般凭经验来,细菌少的,一般做1:10稀释度(如汉堡,面包粉);一般肉制品做1:100稀释度(如菜卷,鱼排);新产品一般做1:100和1:1000稀释度.
食品中大肠菌群,大肠杆菌的检验 3COME文档频道
1. 培养基及试剂
结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA):称取16.6g溶于400ml蒸馏水中,充分搅拌,煮沸2min,置于水浴箱中备用,临用时制备.
1.2 EC肉汤:称取37g溶于1000ml蒸馏水中,加热至完全溶解,分装于小试管中(每支10ml),加入杜氏小管,121摄氏度15min高压灭菌.
1.3 伊红美蓝琼脂(EMB):称取7.5g溶于200ml蒸馏水中,加热溶解.待冷却后倒板,放置在冰箱中备用.
1.13 1:10样品稀释液:做平板记数时制备1.14 的.
2 大肠菌群MPN的测定
2. 1取1:10样品稀释液1ml注入作了适宜标3. 志的平皿内,4. 将冷却
至45度左右的结晶紫中性红胆盐琼脂倾注于每个平皿内,小心旋转平皿,将培养基与样液充分混合.
5. 2待琼脂凝固后,6. 再加3---4mlVRBS覆盖平板表层.
7. 3翻转平板,8. 置于36度培养(本实验培养48h)
2.4计数,计数平板上出现的典型大肠菌群落,典型菌落为紫色,菌落周围有红色的胆盐沉淀环.
9. 大肠杆菌的检验
3.1吸取2ml1:10样品稀释液于EC肉汤管中,放入带盖44.5摄氏度水浴箱中,培养24h,水浴箱的水平面应高于肉汤培养基液面.
3.2观察EC肉汤管中是否产酸产气,取其产酸产气管的培养物划线于EMB平板36摄氏度培养24h.
3.3检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落.
注:最近原料胡椒粉中常出现大肠杆菌.
出口食品沙门氏菌检验
1. 培养基及试剂
1. 1亚硒酸盐胱胺酸增菌液:在小三角瓶中装入90ml蒸馏水,2. 高压灭菌后,3. 加入2g(大约1勺)SC,4. 振摇使其完全溶解,5. 备6. 用.
1. 2硫乳琼脂(DHL)(为弱选择性培养基,2. 用于沙门氏菌,3. 志贺氏菌的选择性分离):称取15g溶于200ml蒸馏水,4. 浸泡,5. 煮沸至完全溶解,6. 冷却倾注灭菌平板(大约例十二三个平板)
1. 3三糖铁琼脂:称取65g溶于1L蒸馏水中,加热溶解,分装于13*100mm的小试管中,115℃高压灭菌15min,然后制成斜面琼脂.
7. 增菌培养:
无菌操作剪一些样品放入SC增菌液中,作好标志,于37度培养24h左右,进行直接选择性增菌.
8. 分离培养
将增菌液摇匀,以无菌 操作,用接种环挑取一环,划线于DHL平板上,于37度培养24h左右.
9. 观察:
观察有无特征菌落:无色透明有黑色中心或几乎全为黑色,有些菌株无色半透明.
5.生化签定:
沙门氏菌出现典型菌落后,用接种针挑取2个典型菌落接种于尿素酶琼脂一管,接种后无须灭菌接种针,直接再分别接种于三糖铁琼脂两管于37℃培养24±2h.
6.结果:
三糖铁琼脂
斜面底层产气硫化氢尿素酶琼脂KA＋(—)＋(—)-(变黄)
注:K—产碱,A—产酸,+——阳性反应,(—)——少见反应,———阴性反应.
注:一般肉类,鱼类制品做沙门氏菌的检验.
食品中金黄色葡萄球菌检测方法
1, 培养基及试剂
1.1 7.5%NACL肉汤:称取88g溶于1l蒸馏水中,1.2 加热煮沸至完全溶解,1.3 分装于大试管中(每支10ml),1.4 121度1min高压灭菌.
1.5 B—P:称取 溶于40ml0蒸馏水中,1.6 加热煮沸至完全溶解,1.7 121度15min高压灭菌,1.8 冷却后,1.9 加入四支亚碲酸盐卵黄增菌液,1.10 摇匀.倾注灭菌平板.
1.11 1:10样品稀释液:菌落记数时制备1.12 的.
2. 增菌培养:无菌操作,3. 吸取2ml1:10样品稀释液,4. 注入7.5%氯化钠肉汤试管中,5. 于36度左右培养24h.
6. 平板记数:
无菌操作,用接种环挑取一环,划线于B---P平板上,将平板翻转,36度左右培养24h.挑选典型菌落进行记数.
金黄色葡萄球菌的单个菌落在B—P琼脂平板上呈圆形,表面光滑,凸起,湿润,直径2---3mm,灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰带.
理化部分
1, 有机磷的检验方法:
1.原理
含有机磷的试样在富氢焰上燃烧,以HPO碎片的形式放射出526波长的特性光,这种光通过滤光片选择后,由光电倍增管接收,转换成电信号,经微电流放大器放大后被记录下来,试样的峰面积或峰高与标准品的峰面积或峰高进行比较定量
2.仪器
天平,组织捣碎机,漏斗,小药勺,磨口三角瓶,旋转蒸发器,移液管(5ml),无菌注射器,5ul滤膜,小离心管,记号笔
3.试剂
乙酸乙酯,无水硫酸钠
4.方法
称取25.0g样品,加入50ml乙酸乙酯,约25g无水硫酸纳,置于组织捣碎机中,捣碎过滤用10ml乙酸乙酯洗涤残渣两次,并入滤液,将滤液置于旋转蒸发器上蒸干,用2.5ml乙酸乙酯定容,用注射器经过滤膜注入小离心管中,供气相色谱测定.
5.色谱条件
色谱柱:毛细管柱
色谱柱的温度:60(2min)10/min
进样口温度:260摄氏度,检测器温度:280摄氏度
载气和尾气:氮气:纯度99.99%,0.5ml/min(前压0.62ml/min),
尾吹气:30ml/min;
氢气:50kpa,空气30kPa
进样口:分流/不分流毛细管进样口
进样方式:不分流进样.
出峰顺序:敌敌畏,甲胺磷,氧化乐果,乐果,毒死稗,对硫磷
二,有机氯的检验方法:
1仪器
天平,组织捣碎机,漏斗,三角瓶(有磨口三角瓶),大离心管,旋转蒸发器,无菌注射器,滤膜,移液管(5ml,10ml),试管架,吸管,旋涡混匀器,离心机
2试剂
丙酮,正己烷,20g/l硫酸钠
3方法
称取20g样品,精确至0.1g,加入10ml丙酮,置于捣碎机中,捣碎过滤.
准确吸取20ml20g/l硫酸钠溶液,1ml0正己烷,5ml滤液,于离心管中,混匀离心.取上清液通过盛有无水硫酸纳的漏斗,再于离心管中加入10ml正己烷,混匀离心,将上清液同样过滤,用2ml正己烷清洗漏斗内残渣,将合并的滤液于旋转蒸发器上浓缩至干,再以正己烷2ml定容供气相色谱测定.
4仪器条件
柱温:270摄氏度,进样口温度:280摄氏度,检测器温度:300摄氏度.
尾吹气:30ml/min,进样方式:不分流.
出峰顺序:氯氰菊酯,氰戊菊酯.
